Bepaling van het oxaalzuurgehalte in fruit en groenten door middel van hogedruk-vloeistofchromatografie (HPLC)
1. Experimenteel principe en methodeontwerp
Als een veelvoorkomend organisch zuur in groenten en fruit, heeft het gehalte aan oxaalzuur een directe invloed op de smaak en voedingswaarde van voedsel. Dit experiment maakt gebruik van reversed-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC). Onder zure omstandigheden in de mobiele fase wordt oxaalzuur basislijn-gescheiden van storende stoffen met behulp van een C18-chromatografiekolom. Een ultravioletdetector ingesteld op 210 nm wordt gebruikt voor kwantitatieve analyse, gebaseerd op de UV-absorptiekarakteristieken van de carboxylgroepen in oxaalzuurmoleculen.
2. Standaardcurve en monstervoorbereiding
Voor de bereiding van standaardoplossingen wordt een verdunningsmethode met gradiënt gebruikt: weeg nauwkeurig 25,0 mg oxaalzuurdihydraat af en verdun dit tot 25 ml met ultrapuur water om een stamoplossing van 1 mg/ml te verkrijgen. Deze wordt vervolgens stapsgewijs verdund tot een reeks standaardoplossingen met concentraties van 50, 100, 200, 400 en 800 µg/ml, waarbij elke concentratie in drievoud wordt geïnjecteerd.
Voor de monstervoorbereiding wordt gebruikgemaakt van extractie met behulp van microgolven: weeg 5,00 g fruit-/groentehomogenaat af, voeg 10 ml van een 0,1 mol/l zoutzuuroplossing toe, behandel dit gedurende 10 minuten bij 60 °C met microgolven, filtreer het door een membraanfilter van 0,45 µm en vang het filtraat op voor analyse.
3. Optimalisatie van de chromatografische omstandigheden
De mobiele fase bestaat uit een 0,01 mol/L kaliumdiwaterstoffosfaatbuffer (pH 2,5) – acetonitril (95:5) systeem, met een stroomsnelheid van 0,8 mL/min en een kolomtemperatuur van 35 °C. Door de verhouding acetonitril aan te passen, blijkt dat wanneer de organische fase meer dan 10% bedraagt, de retentietijd van oxaalzuur verkort tot minder dan 3 minuten, maar er treedt piektailing op. Onder de uiteindelijk geoptimaliseerde omstandigheden bedraagt de retentietijd van oxaalzuur 4,2 minuten, wat resulteert in een volledige scheiding van het aangrenzende citroenzuur en appelzuur (resolutie > 1,5).
4. Methodevalidatie
De lineaire bereikverificatie toont een goede lineaire relatie tussen piekoppervlakte en concentratie in het bereik van 10–1000 µg/mL (R² = 0,9993). De detectielimiet (LOD), bepaald met de signaal-ruisverhoudingsmethode, is 0,5 µg/mL. Bij herhaalbaarheidstesten bedraagt de relatieve standaardafwijking (RSD) voor zes herhaalde bepalingen van hetzelfde spinaziemonster 1,8%. Spike-recovery-experimenten op drie niveaus (80%, 100% en 120%) leveren gemiddelde recoveries op van respectievelijk 98,2%, 102,4% en 97,8%, waarmee aan de eisen voor kwantitatieve analyse wordt voldaan.
5. Analyse van echte monsters
Zes commercieel verkrijgbare groenten en fruitsoorten werden getest: spinazie (356 ± 12 mg/100 g), selderij (215 ± 9 mg/100 g), tomaat (18 ± 2 mg/100 g), appel (6 ± 1 mg/100 g), banaan (niet gedetecteerd) en broccoli (89 ± 5 mg/100 g). Een vergelijking met de nationale standaardmethode (GB 5009.277-2016) toont aan dat de relatieve afwijking tussen de twee methoden minder dan 5% bedraagt, wat de betrouwbaarheid van deze methode bevestigt. Met name de HPLC-methode vertoont een hogere gevoeligheid dan traditionele titratiemethoden bij de analyse van monsters met een lage concentratie.
6. Kernpunten
Controleer de pH-waarde strikt tijdens de monstervoorbehandeling. Als de pH van het extract hoger is dan 3, zal neerslag van calciumoxalaat leiden tot lage testresultaten. De mobiele fase moet dagelijks vers worden bereid om zoutneerslag en verstopping van de kolom te voorkomen. Spoel de kolom na elke 20 injecties gedurende 30 minuten met een mengsel van acetonitril en water (30:70) om de efficiëntie van de kolom te behouden. Voor pigmentbevattende monsters (bijv. paarse kool) wordt aanbevolen om vóór injectie een zuiveringsstap met vastefase-extractie toe te voegen.
7. Toepassings- en uitbreidingsrichtlijnen
Deze methode kan worden uitgebreid naar de detectie van oxaalzuur in biologische monsters zoals urine en bloed. Door de samenstelling van de mobiele fase aan te passen (bijvoorbeeld door toevoeging van tetrabutylammoniumhydroxide) kunnen oxaalzuur en zijn metabolieten gelijktijdig worden bepaald. In combinatie met een massaspectrometer kan een nauwkeurigere methode voor spoordetectie worden ontwikkeld. In de voedingsmiddelenindustrie kan deze methode belangrijke gegevens leveren ter ondersteuning van de selectie van rassen met een laag oxaalzuurgehalte en de optimalisatie van kookprocessen.
Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. – Oxaalzuur
Zibo Anhao Chemical Co., Ltd. is een betrouwbare leverancier en exporteur van hoogwaardig oxaalzuur (industriële kwaliteit, minimaal 99,6%) uit Shandong, China. Ons oxaalzuur is een witte kristallijne vaste stof, ook bekend als ethaandizuur, met de molecuulformule C₂H₂O₄. Het kenmerkt zich door een hoge zuiverheid, lage onzuiverheden en een stabiele kwaliteit over verschillende batches heen, waardoor het voldoet aan de eisen van de textiel-, leer-, metaal-, zeldzame-aardemetalen-, chemische reinigings- en bouwsector.
Wij leveren zowel watervrij als dihydraat oxaalzuur, verkrijgbaar in zakken van 25 kg, 50 kg en big bags van 1000 kg. Dankzij strenge kwaliteitscontroles, complete testrapporten en flexibele leveringsplannen garanderen wij een stabiele levering en consistente prestaties voor onze wereldwijde afnemers. Onze producten worden op grote schaal geëxporteerd naar Zuidoost-Azië, Europa, Afrika en Noord- en Zuid-Amerika en worden erkend voor hun betrouwbare kwaliteit en concurrerende prijzen.
Kies Zibo Anhao Chemical voor een betrouwbare levering van oxaalzuur en professionele totaalservice op het gebied van chemicaliën.
Kies Zibo Anhao Chemical voor hoogzuiver oxaalzuur dat stabiele prestaties en waarde voor uw bedrijf levert. Neem contact met ons op voor bulkbestellingen of technische specificaties: info@anhaochemical.com
